Floresan mikroskop: metodu prinsipləri

yüngül daha qeyri-üzvi və üzvi maye udma və yenidən emissiya Yakamoz və ya floresan nəticəsidir. hadisələr arasında fərq işıq flux udma və emissiya arasında interval müddəti. Bu proseslərin floresan Yakamoz isə, demək olar ki, eyni zamanda baş zaman - bir gecikmə ilə.

tarixi məlumat

1852-ci ildə Britaniya alim Stokes, ilk floresan təsvir. O təcrübələr nəticəsində yeni müddəti təqdim fluorspar, ultrabənövşəyi işıq altında qırmızı işıq buraxmaq. Stokes maraqlı fenomen qeyd edib. Bu fluorescent radiasiya dalğa həmişə excitation işıq axını daha çox olduğunu aşkar.

19-cu əsrdə fərziyyə təsdiq etmək çox təcrübələr olmuşdur. Onlar nümunələri bir sıra ultrabənövşəyi işıq təsiri altında fluoresce göstərdi. materialları arasında digər şeylər olmuşdur kristalları, qatranlar, minerallar, xlorofil, xam narkotik, qeyri-üzvi birləşmələr, vitaminlər, yağlar arasında. bioloji test üçün boyalar birbaşa istifadə 1930-cu ildə yalnız başladı

Floresan mikroskop: təsviri

20-ci əsrin işlər birinci yarısında istifadə olunan materialların bəzi yüksək xüsusiyyətləri sərgilədi. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. üsulları təzadlı ilə əldə edilə bilmədi performans sayəsində floresan mikroskop üsulu Biotibbi və bioloji tədqiqat mühüm alət olmuşdur. Eyni əhəmiyyətli nəticələr əldə və materialları üçün idi.

? Nə üstünlükləri floresan mikroskop metodu edir? yeni materiallar istifadə mümkün və yüksək xüsusi mobil submicroscopic komponentlərinin seçilməsi olub. Floresan mikroskop vahid molekulların aşkar edə bilərsiniz. boyalar müxtəlif bir neçə maddələr müəyyən imkan verir. öz növbəsində, nümunə xüsusi xassələri asılıdır avadanlıq, difraksiya həddi məhdud məkan həlli baxmayaraq, bu səviyyəsindən aşağıda molekulların müəyyən də mümkündür. şüalanma eksponat autofluorescence sonra müxtəlif nümunələri. Bu fenomen geniş petrologiya, botanika, yarımkeçirici sənayesində istifadə olunur.

Features

unspecific autofluorescence tez-tez mürəkkəb və ya çox zəif və ya çox güclü heyvan toxumalarının və ya patogenlər öyrənilməsi. Lakin tədqiqatlar dəyəri müəyyən bir dalğa da həyəcanlı material komponentləri daxil tətbiqi və zəruri işıq axını intensivliyi saçan əldə edir. Fluorochromes (görünən və ya görünməyən) qurumlara əlavə müstəqil bilən boyalar kimi fəaliyyət göstərir. Belə ki, onlar hədəf yüksək seçicilik və kvant gəlir var.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. Floresan mikroskop geniş təbii və sintetik boyalar Advent ildən istifadə edilmişdir. Onlar Emissiya və Məni ehtiraslandırır müəyyən intensivliyi anket sahib və xüsusi bioloji hədəfləri hədəf.

fərdi molekulların müəyyən

Tez-tez, ideal şəraitdə, bir ayrı element parıltı üzv ola bilərsiniz. Bunun üçün digər şeylər arasında, bu detector və optik fon kifayət qədər aşağı səs-küy təmin etmək lazımdır. görə 300 min. fotonların buraxmaq bilər photobleaching edilməməsi fluorescein molekul. prosesinin 20% toplanması səmərəliliyi və təxminən 60 min məbləğində onları üzv ola bilərsiniz.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. avalanche photodiodes və ya elektron vurma əsasında floresan mikroskop, tədqiqatçılar ikinci vasitəsilə fərdi molekulların davranış müşahidə etmək icazə və bəzi hallarda hətta dəqiqə.

mürəkkəblik

optik səs fon yatırılması lehinə əsas məsələ. Due filtreler və linzalar bəzi autofluorescence nümayiş dizayn istifadə olunan materialların çox erkən mərhələlərində elm səyləri aşağı floresan olan komponentlərinin istehsalı yönümlü idi ki. Lakin sonrakı təcrübələr yeni nəticələrə gətirib çıxarmışdır. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. Xüsusilə, bu, ümumi daxili əks əsasında floresan mikroskop, bu aşağı fon və yüksək intensivliyi Məni ehtiraslandırır yüngül nail olmaq üçün imkan verir ki, aşkar edilmişdir.

mexanizm

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. ümumi daxili əks əsasında floresan mikroskop prinsipləri, evanescent dalğa və ya evanescent istifadə edir. Müxtəlif media arasında sərhəd baş verir kırılma indeksləri. Bu halda, ışık prizmasından keçir. Bu yüksək kırılma index parametri var.

aşağı parametri ilə suda həll və ya şüşə bitişik prizma. daha kritik bir bucaq o yönəlmiş yüngül bir şüa varsa, şüa tamamilə interfeys əks olunur. Bu fenomen, öz növbəsində, nonpropagating dalğaları səbəb olur. Başqa sözlə, yaradılan elektromaqnit sahəsində məsafədə 200-dən az nanometr üçün aşağı kırılma index parametri ilə orta nüfuz edir.

evanescent dalğa işıq intensivliyi fluorophores salmaq üçün kifayət olacaq. Lakin, onun çox kiçik dərinliyi, onun həcmi çox kiçik olacaq. Nəticədə aşağı səviyyəli background edir.

modifikasiya

Floresan mikroskop ümumi daxili əks əsaslanır, epi-işıqlandırma ilə həyata keçirilə bilər. Bu yüksək ədədi diyafram ilə linzalar tələb edir (ən azı 1,4, lakin bu 1.45-1.6 çatmışdır ki, arzu olunandır) və qismən sahəsində aparatı işıqlandırdı. Sonuncu kiçik ləkə ölçüsü ilə əldə edilir. daha uniformity üçün stream bir hissəsi ilə bağlanacaq nazik üzük istifadə. ümumi əks var sonra tənqidi baxımdan, biz lens immersion orta və mikroskop əhatə şüşə refraksiya yüksək səviyyədə lazımdır.